سالارباشی و همکاران ضمن تایید همین موضوع بیان کردند که هر چه روند تغییر pH به pH طبیعی گیاه بومادران (۶.۳) نزدیک می‌شود مقدار استخراج ترکیبات فنولیک افزایش می‌یابد(۵).
داده ها حاکی از آن است که جهت دستیابی به عصاره ای با حداکثر مقدار ترکیبات فنولیک در شرایط مطالعه بهترین شرایط دمای ۴۰ درجه سانتیگراد̨̨̨ ۷.۳pH= و زمان ۳۲ دقیقه بدون در نظر گرفتن سایر پارامترهای اندازه‌گیری شده برای عصاره‌های استحصالی (Dpph و رنسیمت) می‌باشد. تحت این شرایط میزان استخراج ترکیبات فنولیک از عصاره به بیش از ۱۶ mg گالیک اسید (استاندارد ترکیبات فنولیک) به ازای ۱ گرم از پودر اولیه پیش‌بینی شد. با توجه به جدول (۴-۱)، زمان و pH به ترتیب به عنوان موثرترین و کم اثر گذارترین فاکتور شناسایی شدند.

شکل ۴-۵-desirability for total phenolic
در روش RSM مرحله‌ای به نام Verification وجود دارد، در این مرحله می‌بایست مقدار استخراج ترکیبات فنولی کل را در مرحله آزمایش با مقدار پیشگویی شده توسط مدل به طریق آماری مقایسه نمود دراین بررسی پس از انجام این مرحله ، مقادیر مشاهده شده(Y₀) با مقادیر پیش‌بینی‌شده (Y) مقایسه گردید و محاسبات درشکل۴-۱۰، قابل مشاهده است؛ نتایج، بیانگر همبستگی بسیار خوب بین نتایج بدست آمده با روش تجربی و مقادیر پیش‌بینی‌شده با روش آماری است (شکل۴-۶).

شکل۴-۶- مقایسه مقادیر مشاهده شده با مقادیر پیش بینی شده حاصل از هر تیمار
با توجه به اینکه کلیه پارامترها دارای اثر معنی داری در مدل بودند.(p<o.oo1) بنابراین می توان با توجه به پارامتر های معنی دار شده معادلی کلی مدل Quadratic را به صورت زیر گزارش کرد:
معادله ۱
Y=-27.78+0.654x-7.055y+11.30z-0.018x²-5.32y²-0.97z²+6.111x*y-0.04x*z+0.04166y*z
y=temp and x=time and z= pH
همچنین با توجه به جدول(۴-۱) و معادله ۱ پارامتر زمان (t) دارای بیشترین تاثیر بر روی استخراج ترکیبات فنولی عصاره گیاه پونه گلرنگ می باشد.
۴-۲-۲-اثر روش استخراج بر مقدار استخراج عصاره استحصالی و مقدار کل ترکیبات فنولیک عصاره برگ گلرنگ
به منظور پی بردن به تاثیر نوع روش استخراج در راندمان عصاره‌گیری، عصاره برگ گلرنگ با دو روش مختلف استخراج با حلال یعنی غرقابی و اولتراسوند انجام شد. نتایج حاصله نشان دادند که بین راندمان عصاره‌گیری روش غرقابی و اولتراسوند تفاوت معنی‌داری از لحاظ آماری (p<0.05) وجود ندارد. به نظر می‌رسد زمان بسیار طولانی‌تر روش غرقابی نسبت به اولتراسوند جبران قدرت بالاتر امواج مافوق صوت را کرده و باعث شده اختلاف معنی‌داری در راندمان عصاره‌گیری این دو روش مشاهده نشود. نتیجه حاصله با گزارش گلی و همکاران (۲۰۰۵) سازگار است (۳۰) این محققان گزارش کردند که بین بازده عصاره‌گیری پوست پسته بوسیله روش های اولتراسوند و غرقابی توسط حلال های آب متانول و اتیل-استات، اختلاف معنی داری مشاهده نکردند. همچنین دزاشیبی و همکاران (۲۰۰۷) نیز اعلام کردند که بین راندمان عصاره گیری، عصاره برگ حنا با دو روش مختلف استخراج با حلال یعنی غرقابی و اولتراسوند در سطح آماری (p<0.05) تفاوت معنی‌داری مشاهده نشد.(۳)
شکل۴-۷- اثر نوع روش بر بازده استخراج عصاره
اندازه گیری مقدار کل ترکیبات فنولیک عصاره های استخراجی با روش های غرقابی و اولتراسوند حاکی از آن بود که روش استخراج تاثیر به سزایی بر میزان کل ترکیبات فنولیک بر حسب اسید گالیک دارد. همانطور که در شکل۴-۷ مشاهده می‌شود روش اولتراسوند، ترکیبات فنولیک بیشتری را نسبت به روش غرقابی استخراج کرده است. می‌توان گفت استرس برشی حاصل از امواج مافوق صوت باعث شکسته شدن مولکولهای پلیمری بزرگ و در نتیجه باعث استخراج بهتر ترکیبات فنولیک نسبت به روش غرقابی می‌شود. این نتایج با گزارشAlbu. S و همکاران در سال ۲۰۰۴ مطابقت دارد، این محققان گزارش کردند که استفاده از روش اولتراسوند باعث افزایش کارنوسیک اسید استخراج شده از رزماری می‌شود.(۱۰) یاکین و همکاران در سال ۲۰۰۹ ضمن بررسی روند استخراج ترکیبات فنولیک از نوعی از مرکبات (Citrus) بیان داشتند که استفاده از اولتراسوند باعث افزایش معنی‌داری در استخراج ترکیبات فنولیک نسبت به روش غرقابی شده است.(۹۱) همچنین دزاشیبی و همکاران (۲۰۰۷) گزارش کردند که روش اولتراسوند ترکیبات فنولیک بیشتری را بر حسب اسید تانیک نسبت به روش اولتراسوند استخراج کرده است.(۳)
شکل ۴-۸-اثر روش استخراج بر مقدار کل ترکیبات فنولیک عصاره
۴-۳-اثرسه فاکتور دما، زمان و pH مختلف بر فعالیت آنتی‌اکسیدانی عصاره
شکل RSM (4-9) حاکی از این موضوع است که با افزایش دما و زمان، کاهش در مقدار شاخص IC50 مشاهده می شود این کاهش تا تا دمای ۴۱ درجه و زمان ۳۰ دقیقه ادامه داشته و پس از آن روند آن ثابت می شود.

شکل ۴-۹- اثر متقابل دو متغیر زمان ودما بر روی شاخص IC₅₀
شکل (۴-۱۰) نمایانگر اثر متقابل زمان و pH می باشد. با توجه به شکل میتوان اینگونه استنباط کرده افزایش زمان تا ۲۷ دقیقه سبب کاهش در شاخص IC50 شده است و پس از آن این روند پابت می شود. اما در ارتباط با فاکتور pH تا حدود Ph=6.5 کاهش در مقدار شاخص IC50 مشاهده می شود ولی پس از آن مقدار این شاخص افزایش می یابد.

شکل ۴-۱۰- اثر متقابل دو متغیر زمان و pH بر روی شاخص IC₅₀
شکل (۴-۱۱) گویای آن است که افزایش در فاکتور دما تا ۳۹ درجه نیز باعث کاهش در مقدار شاخص IC₅₀